TGIRT™-III Enzyme

规格：

 10 Reactions (TGIRT10)

50 Reactions (TGIRT50)

5 x 50 µl (TGIRT5x50)

10 x 50 µl (TGIRT10x50)

单位定义：

TGIRT的一个单元® -III逆转录酶（RT）活性是酶的使用聚在60℃下聚合1纳摩尔的dNTP的在1分钟（RA）所需要的量/寡（dT）42作为底物。

酶浓度：

200单位/μl

酶储存缓冲液：

20mM Tris-HCl（pH 7.5），500mM KCl，1mM EDTA，1mM DTT，50％甘油

酶属性和新颖活动：

比逆转录逆转录酶更高的热稳定性，持续合成能力和保真度，允许从高度结构化或重度修饰的RNA （例如tRNA）和包含富含GC的重复扩增的RNA合成全长，端对端cDNA 。1-9,12,15,18

新型端对端模板转换活动，可在反转录过程中连接RNA-seq或PCR适配器，并且无需单独的RNA 3'-适配器连接步骤。1这种模板转换活性极大地促进了链特异性RNA-seq文库的构建，而且比使用随机六聚体引物或使用RNA连接酶进行衔接子连接的方法具有更小的偏差。1,7,8

从退火引物合成cDNA。将退火的引物应具有推测的T 米 > 60的直径： C.酶与反应底物混合，在室温下，通过加入dNTP的反应开始30分钟的预温育，建议。新应用的zui宜条件应该通过测试25-450mM NaCl的一系列盐浓度来确定。

建议用于酶的用途：

1.全面的链特异性转录组分析。8

2.全细胞，外泌体，血浆和其他无细胞RNA的RNA-seq。7,8,15

3.分析miRNA，tRNA和其他小的非编码RNA。1-9,12,15

4. RIP-seq，HITS-CLIP，irCLIP和CRAC用于表征RNA-蛋白质相互作用和核糖体分析。1,10,11

5.通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰。4,5,13,​​14

6.使用诸如SHAPE和DMS修饰的方法进行全基因组或靶向RNA结构作图。1,16

7.富含GC重复扩增的逆转录和定量。18

8.长cDNA的合成。1

9.RT-qPCR。1

10.单链DNA-seq。17

11.分析FFPE肿瘤样本（咨询InGex）。

酶的优点：

1.全面的链特异性转录组分析。

核糖核碎片，通用人类参考RNA样品的TGIRT®-seq概括了人类转录物和穗突起的相对丰度，与非链特异性TruSeq v2相比，并且优于链特异性Tru-Seq v3。TGIRT®-seq比TruSeq v3具有更高的链特异性，并消除了TruSeq固有的随机六聚体引发的取样偏差。TGIRT®-seq显示出更加统一的5'至3'基因覆盖范围，并且比TruSeq识别更多的剪接点。TGIRT®-seq能够在与结构化小型ncRNA相同的RNA-seq中同时分析mRNA和lncRNA，包括tRNA，TruSeq数据集基本上不存在tRNA。8

2.全细胞，外泌体，血浆和其他细胞外RNA的RNA-seq。

快速的处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建<5小时）; 需要少量的RNA（低ng范围）; 包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA的全面转录谱，包括tRNA，pre-miRNA和其他结构化小型ncRNA的全长读段; 比常规方法更少的偏差和更大的链特异性。7,8,15

3.通过TGIRT®模板转换的RNA-seq文库构建，如RIP-seq，HITS-CLIP，irCLIP，CRAC，​​核糖体谱分析。

快速的处理时间（通过PCR步骤对RNA-seq文库构建<5小时）; 需要少量的RNA（低ng范围）; 不需要RNA连接酶，通过减少步骤中的步骤来减少偏倚并提率。1,10,11

4.比逆转录病毒RT更高的热稳定性，持续合成能力和链置换活性。

使用锚定寡核苷酸（dT）引物，可以构建RNA聚合腺苷酸化的RNA文库，与没有ribodepletion步骤的逆转录病毒RT相比，具有更均匀的5'至3'覆盖范围。1

通过基于毛细管电泳的方法（如SHAPE或DMS结构图）进行RNA结构作图，其显着的读数长度和更少的提前停止时间比逆转录病毒RTs更短。1,16

可以分析含有富含GC的重复扩增的RNA模板。18

能够合成来自tRNA和其他小型结构化/修饰的ncRNA的全长，端对端cDNA，这些逆转录病毒RT难以治疗。4-9,12-15     

5.人血浆和大肠杆菌  基因组DNA的ssDNA-seq 。

通过直接在DNA链的3'末端启动DNA合成，同时连接DNA-seq接头而不进行末端修复，拖尾或连接，以更简单的工作流程捕获的DNA末端。能够分析核小体定位，转录因子结合位点，DNA甲基化位点和起源组织。17

参考文献：

1. Mohr, S., Ghanem, E., Smith, W., Sheeter, D., Qin, Y., King, O., Polioudakis, D., Iyer, V.R., Hunicke-Smith, S. Swamy, S., Kuersten, S., and Lambowitz, A.M. Thermostable group II intron reverse transcriptase fusion proteins and their use in cDNA synthesis and next-generation RNA sequencing. RNA 19, 958-970, 2013.
2. Collins, K. and Nilsen, T. Enzyme engineering through evolution: thermostable recombinant group II intron reverse transcriptases provide new tools for RNA research and biotechnology. RNA 19, 1017-1018, 2013.
3. Enyeart, P.J., Mohr, G., Ellington, A.D., and Lambowitz A.M. Biotechnological applications of group II introns and their reverse transcriptases: gene targeting, RNA-seq, and non-coding RNA analysis. DNA 5:2, 2014.
4. Katibah, G.E., Qin, Y., Sidote, D.J., Yao, J., Lambowitz, A.M. and Collins, K. Broad and adaptable RNA structure recognition by the human interferon-induced tetratricopeptide repeat protein IFIT5. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 111, 12025-12030, 2014.  
5. Shen, P.S., Park, J., Qin, Y., Li, X., Parsawar, K., Larson, M.H., Cox, J., Chen, Y., Lambowitz, A.M., Weissman, J.S., Brandman, O., and Frost, A. Rqc2p and 60S ribosomal subunits mediate mRNA-independent elongation of nascent chains. Science 347, 75-78, 2015.
6. Zheng, G., Qin, Y., Clark, W.C., Yi, C., He, C., and Lambowitz, A.M. and Pan, T. Efficient and quantitative high-throughput transfer RNA sequencing. Nat. Methods 12, 835-837, 2015.
7. Qin,Y., Yao,J., Wu,D., Nottingham, R., Mohr, S, Hunicke-Smith, S., Lambowitz, A.M., High-throughput sequencing of human plasma RNA by using thermostable group II intron reverse transcriptases. RNA 22, 111-128, 2016.
8. Nottingham, R.M., Wu, D.C., Qin, Y., Yao, J., Hunicke-Smith, S., and Lambowitz, A.M. RNA-seq of human reference RNA samples using a thermostable group II intron reverse transcriptase. RNA 22, 597-613, 2016.
9. Burke, J.M., Kincaid, R.P., Nottingham, R.M., Lambowitz, A.M., and Sullivan, C.S. DUSP11 activity on tri-phosphorylated transcripts promotes Argonaute association with noncanonical viral microRNAs and regulates steady state levels of cellular non-coding RNAs. Genes & Dev. 30, 2071-2092, 2016.

10. Zarnegar, B.J., Flynn, R.A., Shen, Y., Do, B.T., Chang, H.Y. and Khavari, P.A. irCLIP platform for characterization of protein-RNA interactions. Nat. Methods 13, 489-492, 2016.
11. Haque, N. and Hogg, J.R. Easier, better, faster, stronger: Improved methods for RNA-protein interaction studies, Mol. Cell, 2016 http//dx.doi.org/10.1016/j.molcel.2016.05.019
12. Bazzini, A.A., del Viso, F., Moreno-Mateos, M.A., Johnstone, T.G., Vejnar, C.E., Qin, Y., Yao, J., Khokha, M.K., and Giraldez, A.J. Codon identity regulates mRNA stability and translation efficiency during the maternal-to-zygotic transition. EMBO J. 35, 2087-2103, 2016.
13. Clark, W.C., Evans, M.E., Dominissini, D., Zheng, G., and Pan, T. tRNA base methylation identification and quantification via high-throughput sequencing. RNA 22, 1771-1784, 2016.
14. Liu et al. ALKBH-mediated tRNA demethylation regulates translation. Cell 167, 816-828, 2016,
15. Shurtleff, M.J., Yao, J., Qin, Y., Nottingham, R.M., Temoche-Diaz, M., Schekman, R., and Lambowitz, A.M. A broad role for YBX1 in defining the small non-coding RNA composition of exosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 114, 8987-8995, 2017.

16. Zubradt, M., Gupta, P., Persad, S., Lambowitz, A.M., Weissman, J.S., and Rouskin, S. DMS-MaPseq for genome-wide or targeted RNA structure probing in vivo. Nature Methods 10.1038/nmeth.4057, 2016.
17. Wu, D.C., and Lambowitz, A.M. Facile single-stranded DNA sequencing of human plasma DNA via thermostable group II intron reverse transcriptase template switching. Scientific Reports 7, 8421, 2017.
18. Carrell, S.T., Tang, Z., Mohr, S., Lambowitz, A.M, and Thorton, C.A. Detection of expanded RNA repeats using thermostable group II intron reverse transcriptase. Nucleic Acids Res. 46, e1, 2018.

​

我们公司优势是强大的采购，

1：基本什么都能进口，血清，抗体，耗材，还有部分限制进口的，

2：货品全，现经营过700多个品牌，基本所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷偏的产品那就更有优势，

3：提供加急服务，一般1-2周到货，超过时限加急费全免

4：价格公道，绝大部分价格有优势，当然不能保证100%产品都是价格低廉,因为价格低廉意味着没有服务.

5：良好的信誉，大部分客户我们提供货到付款服务，客户包括清华，北大 交大 复旦，中山等100多所大学，ROCHE，阿斯利康，国药 ，fisher等500多家公司

6：我们代理的品牌有：Antibody Research Corporation，arcticzymes，Biorelevant，AmberGen, Inc. ，clemente-associates，clodronaiposomes，Columbia Biosciences，enzyme research，Gene Bridges GmbH，Genovis，AmberGen, Inc.  Biotechnology GmbH，Haematologic Technologies HTI Haemtech，hookelabs，Immudex，Innovative Research of America，inspiralis ，List Biological Laboratories, Inc.，lumafluor，Microsurfaces，multiplicom，nanotools，Pel-Freez Biologicals，pentapharm，progen，Protein Ark，QA-Bio,Inc，QA-Bio,IncQuickZyme Biosciences，Teknova，TriLink BioTechnologies, Inc.，Zyagen Laboratories 等

7：我们还是invitrogen,qiagen,Midland BioProducts Corporationam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知名*批发，欢迎合作。