jembio Klenow 片段，DNA 聚合酶简介

jembio Klenow 片段，DNA 聚合酶简介

Klenow Fragment

Klenow ，大肠杆菌 DNA 聚合酶 l 酶的大片段，保留聚合酶 l 的聚合酶和校对 3'->5' 外切核酸酶活性。
描述：缺乏 5'-核酸外切酶活性 (1)。超纯重组酶。用于 Sanger 双脱氧测序 (2)。适用于第二链 cDNA 合成 (3)。用于 3'-末端标记和填充 5'-突出粘性末端 (4)。
单位定义：一个单位是在 37oC 下 30 分钟内将 10 nmoles 的总核苷酸掺入酸不溶形式所需的酶量。
储存条件：储存在 –20oC。
储存缓冲液：50 mM 磷酸钾 (pH 7.0)、0.25 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。
测定条件：67 mM 磷酸钾 (pH 7.4)、6.7 mM MgCl2、1 mM 二硫苏糖醇、dCTP、dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP 各 0.033 mM，以及 4.5 µg 活化 DNA。在 100 µl 反应体积中，在 37oC 下孵育 30 分钟。
质量控制：对所有制剂进行污染核酸内切酶和 5'-核酸外切酶活性检测。通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳判断，典型的制剂纯度大于 95%。