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MethylEasy™ DNA亚硫酸氢盐修饰技术

 发布时间:2018/6/28 点击量:601

Genetic Signatures成立于2001年,由Geoffrey Grigg博士(原澳大利亚联邦科学与工业研究组织(CSIRO)分子生物学部主任)创立。甲基化分析中使用广泛的方法是亚硫酸氢盐法,由Grigg博士在英国剑桥设想,并被减少到CSIRO实验室的实践中[1]。初的方法随后得到改进,这些改进导致了遗传签名MethylEasy™DNA亚硫酸氢钠修饰产品系列的开发和发布。

由于改进的转化方法和用于胞嘧啶甲基化检测的应用,发现了一个有趣的发现:通过亚硫酸氢钠处理微生物DNA能够将四种核酸碱基还原成仅三个碱基,通过将胞嘧啶转化为胸腺嘧啶。该技术被称为3base ™,是我们的EasyScreen ™病原体检测试剂盒的基石。

此后,遗传标志开发并商业化了一套基于EasyScreen ™实时PCR的产品,用于常规检测传染病。EasyScreen ™产品为医院和病理实验室提供了分子工具,可在快速高通量的环境中筛查各种传染性病原体。

 

MethylEasy™ DNA亚硫酸氢盐修饰技术

DNA亚硫酸氢盐修饰方法

图1 DNA亚硫酸氢盐修饰方法在20世纪90年代初之前,很少有技术能够评估个体CpG位点水平的基因组DNA中的甲基化模式,并且大多数这些技术需要相对大量的起始DNA(高达10μg)。这一难题被GW Grigg博士构想的DNA亚硫酸氢盐修饰方法的出现所克服,并由D Millar博士(现为遗传签名有限公司科学家)与M Frommer博士及其同事[1]共同实践。

用于测定DNA分子中胞嘧啶残基的甲基化状态的亚硫酸氢盐方法取决于亚硫酸氢盐与单链DNA中的胞嘧啶的反应。胞嘧啶转化为尿嘧啶,而5-甲基胞嘧啶(5-mC)不反应(见图1和参考文献2)[2]。可以通过使用聚合酶链式反应(PCR)来扩增经修饰的DNA链,并且可以直接测序,或克隆并测序以从单个DNA分子产生甲基化数据。

遗传签名有限公司发明了一种新的DNA亚硫酸氢盐修饰方法,该方法显着提高了修饰DNA分析的产率和效率。该MethylEasy™ DNA亚硫酸氢盐改性技术已发展为这一创新的结果。

先前的DNA修饰方法
用于确定任何DNA分子的甲基化状态的所有先前的基于亚硫酸氢盐的方法都存在缺点。迄今使用的常规亚硫酸氢盐处理导致起始DNA损失84%至96%[3],需要限制性内切核酸酶消化,长时间的孵育,将DNA包埋在琼脂糖中,多管变化和/或多个DNA纯化步骤。

MethylEasy ™技术解决了所有以前的亚硫酸氢盐疗法的缺点,并具有许多优点,包括:

  • 快速简便的使用 - *转化的纯化DNA总转换时间为90分钟
  • 没有DNA预处理
  • 几乎不会丢失DNA
  • 提高灵敏度
  • 放大效率更高
  • 更长的片段生成和
  • 增加模板DNA的稳定性(室温超过一个月)

[1] Frommer,M.,et。Proc.Nat.Acad.Sci.USA,1992,89,1827-1831。
[2] Hayatsu,H.,Wataya,Y.,Kai,K.,&Iida,S.Biochemistry,1970,9,2858-2866 
[3] Grunau,C.,Clark,SJ和Rosenthal,A.Nucleicic Acids Res。2001,29,e65。

 

MethylEasy™研究套件

ME002-1

ME002 - 40个反应的满意度

MethylEasy ™Xceed

MethylEasy ™Xceed是一种快速,超灵敏的亚硫酸氢盐修饰研究试剂盒,用于检测基因中的甲基化模式

MethylEasy ™Xceed由初的亚硫酸氢盐测序方法的开发(1),以提供DNA转换效率。MethylEasy ™Xceed 的强大功能已经在具有甲基化胞嘧啶单碱基分辨率的里程碑式论文中得到证明,如在人类基因组中(2)。

常规的亚硫酸氢盐处理导致起始DNA损失84%至96%,需要用限制性核酸内切酶消化进行预处理,将DNA包埋在琼脂糖中,或多次管变化和沉淀。

MethylEasy ™Xceed解决了所有这些缺点,并且是一种简单,灵敏和快速的修饰方法,无需DNA预处理,只需50 pg起始材料。将DNA降解减少90%以上以获得真正有代表性的甲基化胞嘧啶分析。

 

MethylEasy™ Xceed

MethylEasy ™Xceed是一种快速,超灵敏的亚硫酸氢盐修饰研究试剂盒,用于检测基因中的甲基化模式

ME002-1

ME002 - 足够40次反应

  • 易于使用 - 不需要DNA预处理和简单的柱纯化
  • 敏感性 - 从少至50皮克的DNA开始(约8种哺乳动物细胞当量)
  • 快速反应 - 从野生型到*修饰的DNA总共需要90分钟的处理时间
  • 优异的DNA保存 - 将DNA降解减少90%以上,以获得真正有代表性的甲基化胞嘧啶分析
  • 更好的转化 - 在测序分析中没有发现DNA未转化的证据
  • 内部控制 - 包括反应信心和产品支持
  • 每个反应的价值很高

英文信息如下:

ProductEasyScreen™ KitMicroorganisms Detected
EB001 & EB001-HTEnteric Bacteria Detection(i) Salmonella spp. 
(ii) Campylobacter spp. 
(iii) Shigella spp. /Enteroinvasive E.coli (EIEC)
(iv) Yersinia enterocolitica. 
(v) toxigenic C. difficile and 
(vi) Listeria monocytogenes
EP001 & EP001-HTEnteric Protozoan Detection(i) Cryptosporidium spp. 
(ii) Giardia intestinalis 
(iii) Dientamoeba fragilis 
(iv) Entamoeba histolytica and 
(v) Blastocystis hominis
EV002 & EV002-HTEnteric Viral Detection(i) Norovirus GI
(ii) Norovirus GII 
(iii) Astrovirus 
(iv) Rotavirus A 
(v) Sapovirus
(vi) Enterovirus
(vii) Bocavirus
(viii) Adenovirus and 
(ix) Adenovirus (40 + 41 only)
CDD001C. difficile DetectionToxigenic C. difficile (targets both tcdA and tcdB)
CDD002C. difficile ReflexHypervirulent C. difficile incl. ribotype 027 & 078 targeting: (i) tcdC gene deletion at position 117, (ii) binary toxin gene (cdtA) and (iii) gyrA gene mutation (fluoroquinolone resistance)

 

 

对于HT(384孔格式)试剂盒,所有试剂盒都足够用于100RXNs或500RXNs

所有  EasyScreen™  病原体检测试剂盒都可用于使用EasyScreen™  样品处理试剂盒准备的  样品。

有关EasyScreen™  工作流程以及与核酸提取和实时PCR平台的兼容性的更多信息,  请访问我们的  EasyScreen™  工作流程页面。

 

Enteric Bacterial Targets

Product #Description
ACD001toxigenic C. difficile Primers and Probe
AEB001Salmonella Primers and Probe
AEB002Campylobacter Primers and Probe
AEB003Shigella spp./Enteroinvasive E.coli (EIEC) Primers and Probe
AEB004Yersinia enterocolitica Primers and Probe
AEB005Listeria monocytogenes Primers and Probe

Enteric Protozoan Targets

Product #Description
AEP001Protozoan Universal Primer Set
AEP002Dientamoeba fragilis Probe
AEP003Blastocystis hominis Probe
AEP004Cryptosporidium Probe
AEP005Giardia intestinalis Probe
AEP006Entamoeba histolytica Probe
AEP007Enterocytozoon bieneusi Primers and Probe
AEP008Encephalitozoon intestinalis Primers and Probe

Enteric Viral Targets

Product #Description
AEV001Norovirus GI Primers and Probe
AEV002Norovirus GII Primers and Probe
AEV003Enterovirus Primers and Probe
AEV004Astrovirus Primers and Probe
AEV005Sapovirus Primers and Probe
AEV016Adenovirus Universal Primers and Probe
AEV007Adenovirus 40/41 Primers and Probe
AEV008Bocavirus Primers and Probe
AEV009Rotavirus A Primers and Probe

Other Targets

Product #Description
AEC00116S Primers and Probe

 

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1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

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7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发,欢迎合作。

 

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