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CompTech MCAR 说明书

 发布时间:2018/7/4 点击量:465

 

AMJS澳金沙门为complementtech一级经销商,Complement Technology,Inc.于2005年成立.CompTech于2005年收购Advanced Research TechnologiesComplement Technology继续为世界各地的科学家提供高质量的试剂,并在我们的清单中增加了许多新试剂。我们尽力为您的应用提供试剂和使用我们补充试剂的建议。 

CompTech MCAR 说明书

名称:       MCAR(Mouse Complement Assay Reagent)

目录编号:     B250

可用尺寸:        1.0 mL

浓度:          > 0.4 mg / mL  

形式:                         冷冻溶液

缓冲区:                       VBS

防腐剂:             0.025%sodium azide

存储:                     -70 Ò C或以下。

来源:                       兔子

产地:                       在美国制造。

 

 

一般描述

小鼠补体很难分析。  小鼠血清迅速丧失其活性,小鼠血清的典型滴度远低于人血清中发现的150-200 CH50单位/ mL。  小鼠品系的补体CH50滴度差异很大(参考文献1,2和3),许多常见的小鼠品系在遗传上缺乏C5(参考文献4和5),这意味着它们即使具有*功能性的补体也不能溶解细胞。系统。  C5足够菌株中低滴度的确切原因尚不*清楚,并且它们对于不同的小鼠品系可能是不同的。  然而,常见的原因是小鼠经典途径组分未被与EA结合的标准抗体有效激活。  在Complement Technology,Inc。,我们开发了一种*的溶血试剂(MCAR =小鼠补体分析试剂),可以使绵羊红细胞敏感,从而提供改善的小鼠CH50滴度。  例如,市售的小鼠补体在下述测定系统中表现出仅约12单位/ mL的CH50,然而,在MCAR存在的情况下,CH50是217.这是MCAR补体效价的18倍。  这在数值上与正常人血清CH50相当,但是测定是不同的。  目前我们不能说这种试剂可以使用多少小鼠品系,但是我们已经使用了3个MCAR,并且它对所有人都起到了同样的作用。  

小鼠血清在小鼠体外也极不稳定。  我们已经(如果在4左100%的损失解冻后观察到活性的快速损失ö ℃过夜)。  因此,我们建议快速解冻NMS并立即在分析中使用它,或者是否需要等分和冷冻NMS。 应在水浴中快速解冻,解冻后立即移至湿冰中,等分并尽快重新冷冻。  使用时,仅在实验装置准备好NMS样品时解冻,并在解冻后将其保持在湿冰上。

 

测定

在补体测定中,即使来自相同的小鼠品系,每批小鼠补体也将具有不同的滴度。  需要进行初步测定以确定要使用的正确NMS量。  如果MCAR增强裂解,正常致敏绵羊细胞(EA)效果很好。  大多数NMS样品通常含有大量血红蛋白,因此使用的血清越多,背景越高。  样品测定方案显示在下表中,其中总测定体积在100uL /测定下保持小。  通常,管应在室温下设置缓冲液和MCAR。  然后加入EA,混合并在室温下温育5分钟。    在室温下将MCAR与EA细胞孵育5分钟或更长时间后,加入NMS以开始测定。  管应该被混合,并转移到一个37 ö ℃水浴用于与通过偶尔(每5-10分钟)再悬浮30分钟涡旋。 

 

需要注意的一点是,在将EA与MCAR混合后不要将EA离心,并且不要制备EA和MCAR的主混合物,然后移液到管中。  这些程序将导致不一致的结果。

 

在37 30分钟后Ó C中,测定法是用200稀释微升冷GVBE,通过混合,涡旋,离心以沉淀未裂解的细胞和200 微升的上清液应转移到一个平底微量和吸光度在415nm读。  或者,可以使用微量比色皿和分光光度计。 

 

EA 在GVB ++中以5×10 8 / ml使用,所有稀释在GVB ++缓冲液中进行。

             

Protocol for Titering Normal Mouser Serum and MCAR

Mix &

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Spin

%

 

 

 

 

 

 

5 min

Mouse

 

30 min

Cold

A415

Lysis

#

GVB++

H2O

GVBE

MCAR

EA

21oC

Serum

Mix

@ 37

GVBE

 

 

1

 

 

70 uL

10 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

2

 

 

70 uL

10 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

3

90 uL

 

 

 

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

4

90 uL

 

 

 

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

5

 

80 uL

 

 

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

6

 

80 uL

 

 

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

7

85 uL

 

 

0 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

8

80 uL

 

 

0 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

9

70 uL

 

 

0 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

10

60 uL

 

 

0 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

11

80 uL

 

 

5 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

12

75 uL

 

 

5 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

13

65 uL

 

 

5 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

14

55 uL

 

 

5 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

15

75 uL

 

 

10 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

16

70 uL

 

 

10 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

17

60 uL

 

 

10 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

18

50 uL

 

 

10 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

19

70 uL

 

 

15 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

20

65 uL

 

 

15 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

21

55 uL

 

 

15 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

22

45 uL

 

 

15 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

23

80 uL

 

 

10 uL

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

24

80 uL

 

 

10 uL

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

             

通过从每个实验测定的A415值(例如#7-22)中减去背景A415值(#1和2的平均值)并除以大裂解(#5和6的平均值)减去%Lysis。背景,然后乘以100。

 

参考

1.   具有典型哺乳动物补体活性水平的Ong GL和Mattes MJ小鼠品系。J Immunol Methods 125:147-158,1989。

 

2.   van Dijk,H。等人。  利用致敏兔红细胞估计小鼠补体活性的经典途径。J Immunol Methods 39:257-268,1980。

 

3.   特里WD等人。  近交系小鼠血清补体活性的差异。  J Immunol。92:576-578,1964。

 

4.   Nilsson UR和Muller-Eberhard,HJ缺乏继承补体缺陷的小鼠的第五组分。J Exp。医学。124:1-16,1967。

 

5. Wetsel,RA等人。小鼠第五补体成分(C5)的缺乏。5'-外显子中的2碱基对基因缺失。J. Biol。化学。265:2435-2440,1990。 

 

 

仅供研究使用。

不适合人类或药物使用。

 

 

 

complementtech产品目录:

 

货号

品名

规格 

目录价

品牌

A098

C1

200µg

3400

complementtech

A099

C1q

1000µg

3162

complementtech

A100

C1q (40% Glycerol)

1000µg

3162

complementtech

A102

C1r Enzyme

250µg

3417

complementtech

A103

C1s Proenzyme

250µg

3366

complementtech

A104

C1s Enzyme

250µg

3281

complementtech

A140

C1 Esterase Inhibitor

1000µg

3468

complementtech

A112

C2

50µg

3298

complementtech

A113

C3

250µg

2482

complementtech

A113c

C3 (concentrated)

1000µg

7327

complementtech

A118

C3a

50µg

3162

complementtech

A119

C3a desArg

50µg

3043

complementtech

A114

C3b

250µg

3094

complementtech

A115

iC3b

250µg

3417

complementtech

A116

C3c

250µg

3706

complementtech

A117

C3d

100µg

3825

complementtech

A105

C4

250µg

3468

complementtech

A105c

C4 (concentrated)

1000µg

8245

complementtech

A106

C4a

50µg

4114

complementtech

A107

C4a desArg

50µg

4114

complementtech

A108

C4b

250µg

2992

complementtech

A109

C4b Binding Protein

250µg

4131

complementtech

A120

C5

250µg

3570

complementtech

A144

C

30µg

6188

complementtech

A144(300)

C

300µg

询价

complementtech

A145

C desArg

50µg

4301

complementtech

A122

C5b,6

50µg

3468

complementtech

A123

C6

250µg

3366

complementtech

A124

C7

250µg

3366

complementtech

A125

C8

250µg

3536

complementtech

A126

C9

250µg

3366

complementtech

A127

SC5b-9 Complex

100µg

2992

complementtech

A135

Factor B

250µg

3213

complementtech

A136

Factor D

25µg

3417

complementtech

A137

Factor H

250µg

2958

complementtech

A137c

Factor H (conc.)

10000µg

询价

complementtech

A138

Factor I

100µg

3366

complementtech

A139

Factor P

100µg

3468

complementtech

A150

Cobra Venom Factor  (USA ONLY)

1000µg

3298

complementtech

A154

Factor Ba

100µg

3298

complementtech

A155

Factor Bb

250µg

6188

complementtech

A118

C3a

50µg

3162

complementtech

A119

C3a desArg

50µg

3043

complementtech

A106

C4a

50µg

4114

complementtech

A107

C4a desArg

50µg

4114

complementtech

A144

C

30µg

6188

complementtech

A144(300)

C

300µg

询价

complementtech

A145

C desArg

50µg

4301

complementtech

A300

C1q-Dpl

1ml

2074

complementtech

A312

C2-Dpl

1ml

2074

complementtech

A314

C3-Dpl

1ml

2482

complementtech

A305

C4-Deficient Guinea Pig

1ml

2448

complementtech

A308

C4-Dpl           

1ml

2482

complementtech

A320

C5-Dpl

1ml

2125

complementtech

A323

C6-Dpl

1ml

2040

complementtech

A324

C7-Dpl

1ml

2074

complementtech

A325

C8-Dpl

1ml

2074

complementtech

A326

C9-Dpl

1ml

2074

complementtech

A335

Factor B-Dpl

1ml

2074

complementtech

A336

Factor D-Dpl   

1ml

2074

complementtech

A337

Factor H-Dpl

1ml

2686

complementtech

A338

Factor I-Dpl    

1ml

2482

complementtech

A339

Factor P-Dpl

1ml

2482

complementtech

A340

C3/C4 Inactivated Serum

1ml

2074

complementtech

A399

C1q/Factor D-Dpl  

1ml

2856

complementtech

A200

Goat Anti-Human C1q     

1ml

1054

complementtech

A212

Goat Anti-Human C2

1ml

2329

complementtech

A213

Goat Anti-Human C3

1ml

1054

complementtech

A218

Rabbit Anti-Human C3a

1ml

2550

complementtech

A205

Goat Anti-Human C4

1ml

1054

complementtech

A206

Rabbit Anti-Human C4a

1ml

2550

complementtech

A220

Goat Anti-Human C5

1ml

1275

complementtech

A221

Rabbit Anti-Human rC

1ml

2550

complementtech

A223

Goat Anti-Human C6

1ml

1275

complementtech

A224

Goat Anti-Human C7

1ml

1275

complementtech

A225

Goat Anti-Human C8

1ml

1275

complementtech

A226

Goat Anti-Human C9

1ml

1275

complementtech

A227

Rabbit Anti-Human SC5b-9 Neo (lgG)

0.2ml

2584

complementtech

A235

Goat Anti-Human Factor B

1ml

1275

complementtech

A236

Goat Anti-Human Factor D

1ml

2499

complementtech

A237

Goat Anti-Human Factor H

1ml

1275

complementtech

A238

Goat Anti-Human Factor I

1ml

1309

complementtech

A239

Goat Anti-Human Factor P

1ml

1462

complementtech

A240

Goat Anti-Human C1-INH        

1ml

1173

complementtech

A260

Rabbit Anti-Human Vitronectin

1ml

1445

complementtech

NHS

Human Serum

1ml

578

complementtech

GPS

Guinea Pig Serum

1ml

714

complementtech

NRS

Rat Serum

1ml

901

complementtech

NMS

Mouse Serum   

1ml

1309

complementtech

B102

GVB++ (with Ca and Mg)

250ml

1224

complementtech

B100

GVB++ (with Ca and Mg)

1 Liter

3264

complementtech

B103

GVB° (without Ca and Mg)

250ml

1224

complementtech

B101

GVB° (without Ca and Mg)

1 Liter

3264

complementtech

B104

GVBE (with EDTA)

250ml

1224

complementtech

B105

GVBE (with EDTA)

1 Liter

3264

complementtech

B110

SGVB++(low ionic strength w/Sucrose)

250ml

1870

complementtech

B111

SGVB++(low ionic strength w/Sucrose)

1 Liter

5066

complementtech

B112

VBS++ (with Ca and Mg)

250ml

1224

complementtech

B113

VBS++ (with Ca and Mg)

1 Liter

3264

complementtech

B200

EA (Ab-sensitized sheep E)

5ml @ 5x108/ml

3043

complementtech

B201

EA (Ab-sensitized sheep E)

10ml @ 5x108/ml

4556

complementtech

B202

EA (Ab-sensitized sheep E)

20ml @ 5x108/ml

6324

complementtech

B210

Es (sheep E)

20ml @ 5x108/ml

2652

complementtech

B300

Er (rabbit E)

5ml @ 5x108/ml

1649

complementtech

B301

Er (rabbit E)

10ml @ 5x108/ml

2652

complementtech

B302

Er (rabbit E)

20ml @ 5x108/ml

3893

complementtech

B400

Zymosan (preactivated)

10ml @ 1x109/ml

2261

complementtech

B106

MgEGTA

10ml @ 0.1M

1139

complementtech

B250

MCAR

1.0 ml

2482

complementtech

Hemolysin

Hemolysin  NEW

2.0 ml

2040

complementtech

 

 

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