ALSTEM是一家位于湾区的早期生物技术公司，拥有快速扩展的产品和服务组合，为生物制药和学术机构提供服务。受到加利福尼亚干细胞研究承诺的启发，ALSTEM于2012年由具有iPS细胞重编程和基因组编辑技术专业知识的科学家创立。
产品描述
NanoFect Transfection Reagent是一种*的聚合物混合物，与的脂质转染试剂盒相比，可以更低的成本向细胞提供更多的DNA和siRNA。NanoFect™是一种功能强大，适用范围广泛的转染试剂，可有效，可重复转染。
产品规格 | |
产品名称 | NanoFect转染试剂 |
目录 ＃ | NF100 |
尺寸 | 1毫升 |
运输 | 环境温度 |
储存和稳定性 | 储存在4°C。根据指示储存，本产品可稳定保存6个月。 |
质量控制 | 每批NanoFect™转染试剂均在人胚胎肾293细胞的转染试验中进行功能测试。 |
限制使用 | 仅供研究使用。不得用于诊断或治疗程序。 |
协议 | 下载 |
NanoFect试剂在DNA和RNA存在下自组装纳米颗粒。这些复合物很容易被靶细胞吸收，从而有效地进行基因递送。由于NanoFect在抗生素和血清存在下起作用，因此无需更换培养基。这种易于使用的方案，在直接添加到靶细胞之前快速一步孵育15分钟，使NanoFect非常适合高通量转染实验。
为了高转染效率和低毒性，以高密度转染细胞。建议使用50-80％的融合度。
细胞应在转染前18至24小时接种，以使细胞密度在转染时达到50~80％汇合。在转染前2小时，向每个孔中新鲜加入含有血清和抗生素的*培养基。
以下方案用于在24孔板中转染，参见表1用于其他培养形式的转染。
1.对于每个孔，在转染前2小时新鲜加入0.5ml正常生长培养基（抗生素不影响结果）。
2.对于每个孔，在50μl不含血清的DMEM中稀释0.5μgDNA，并轻轻混合。
3.将1μlNanoFect试剂加入另一个含有50μl不含血清的DMEM的试管中，轻轻混匀。
4.将NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通过涡旋混合5-10秒。
5.在室温下孵育约15分钟，以使NanoFect / DNA复合物自组装。
6.将100μlNanoFect/ DNA混合物逐滴添加到每个孔中的细胞中，并通过轻轻旋转平板使其均质化。
7.将平板放回细胞培养箱中。
8.转染后24至48小时检查转染效率。
表1.不同文化的推荐量
文化菜表面 | 面积（cm 2） | 细胞数量 | 中等体积（ml） | 质粒（微克） | NanoFect（μl） | 稀释剂体积（μl） |
96孔 | 0.3 | 1-1.5x104 | 0.1 | 0.1 | 0.3 | 10 |
48孔 | 1 | 2.5-5x104 | 0.25 | 0.25 | 0.75 | 20 |
24孔 | 2 | 0.5-1x105 | 0.5 | 0.5 | 1.5 | 50 |
12孔 | 4 | 1-2x10 5 | 1 | 1 | 3 | 100 |
6孔/ 35毫米 | 9.5 | 2-4x10 5 | 2 | 2.5 | 7.5 | 200 |
60毫米/ T25 | 28 | 5-10x105 | 五 | 6-8 | 15-24 | 300 |
100毫米/ T75 | 79 | 1.5-3x106 | 10 | 15-20 | 40-60 | 500 |
150毫米/ T150 | 153 | 5-9x10 6 | 20 | 25-40 | 65-120 | 1000 |
注意：对于不同的细胞类型，NanoFect（μL）：DNA（μg）的适合比例约为3：1。我们建议将NanoFect（μL）：DNA（μg）比例为2：1作为起点，通常可以提供令人满意的转染效率和不可见的细胞毒性，但NanoFect的量可以从2到4μl/μgDNA调整，具体取决于要转染的细胞系。为确保NanoFect / DNA复合物颗粒的宜尺寸，我们建议使用含有高葡萄糖的无血清DMEM稀释DNA和NanoFect Reagent。
| 货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
| VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
| VC100 | 慢病毒沉淀解决方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| V020 | TransPlus™病毒转导增强剂 | 100μl/500μl | alstembio |
| CILV02 | hTERT细胞永生化试剂盒 | 5 x20μl | alstembio |
| VC200 | 逆转录病毒沉淀解决方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| VP100 | 慢病毒包装混合物 | 200μl | alstembio |
| VP200 | 逆转录病毒包装混合物 | 200μl | alstembio |
| NF100 | NanoFect转染试剂 | 1毫升 | alstembio |
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