Smarttube PROT1说明书

PROT1, 100 Test

$500.00

一瓶蛋白质组稳定剂。体积足以稳定一百五十五毫升全血样本。还包括解冻在稳定剂中冷冻保存的样品后使用的缓冲液：THAWLYSE1“Thaw-Lyse，1000X Concentrate”。 

所需缓冲区：

1倍水样(用蒸馏水稀释1000倍浓缩液，使工作浓度达到1倍)。

缓冲液应在室温染色缓冲液(即。磷酸盐缓冲液0.5%牛血清白蛋白)缓冲液应在4℃

可能需要的其他缓冲区：

1倍缓冲液2(用蒸馏水稀释5倍浓缩液，使工作浓度达到1倍)。缓冲器应在室温下。

礼仪:

如果样品没有冻结，因为分析将在同一天进行，请继续进行第二步。在冷水浴(10°C至15°C)中用搅拌水(即.=‘class 1’>)解冻冷冻样品.旋转磁性 搅拌棒或使用轨道震动器)大约20分钟，直到样品*解冻。另一种方法是，在4°C冰箱的开式机架中解冻管子大约30分钟，直到 样品是*解冻的，不要使用泡沫塑料机架来保存样品，因为样品要从-80°C快速过渡到*解冻状态是很重要的。一旦样品迅速解冻，m 敬下一步。

2.加入1倍的SAW-Lyse缓冲液，比例为4：1的稳定样品(即。如果原始样本为全血1ml，则加入1.4ml稳定剂，总体积为2。 稳定后.4ml；在此基础上加入至少9.6ml的1xThaw-Lyse缓冲液)。将样品在室温下搅拌10分钟。

3.600×g离心，室温下离心5分钟，取白细胞。扔掉上清液。

4.将球团置于25 ml的1倍Saw-Lyse缓冲液中，室温下孵育10分钟。在室温下，以600×g离心5分钟。丢弃上清液。 如果球团是相对白色的，红细胞溶解是*的。

红细胞溶解完成后，样品再悬浮在染色介质中，转移到FACS管或板上，用染色介质冲洗。将样品按600 x g离心5次 几分钟。现在可以像用多聚甲醛固定的白细胞一样对样品进行染色，使用固定细胞标准染色规程。注意进行细胞内染色 细胞必须用酒精渗透。90%甲醇)或洗涤剂(即。0.2%的皂甙)作为智能管道系统，就像传统的固定方法一样，产生细胞膜为s的细胞 可渗透于小分子染料，如碘化丙酸丙酯，但在其他方面是完整的，不提供适当的抗体进入细胞内部，而不经alc进一步渗透。 乙醇或洗涤剂

Lotus公司出品的群件系列软件

建议在一项研究中对用于解冻样品的条件(水浴温度、搅拌和持续时间)进行标准化。

完整的红细胞溶解通常是在步骤4之后实现的。室温下稳定时间较长或样品在4°C(或更高温度)保温时间较长 皱缩可能会使红细胞溶解更加困难。

如果红细胞溶解在步骤4后未完成，请执行以下步骤：

A1.将球粒置于大于15 ml的1xLyse缓冲液中，在室温下孵育10分钟，与原药丸相同，丢弃上清液。如果球团是白色的，表示红细胞溶解。 完成后，继续上面的步骤5。如果没有，请继续下面的步骤A2。

A2.将球团置于大于15 ml的1倍Saw-Lyse缓冲液中，在室温下孵育10分钟，与以前相同，丢弃上清液。球团应该是相对白色的，表示红细胞溶解。 S是完整的。继续执行上面的步骤5

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